home *** CD-ROM | disk | FTP | other *** search
/ Shareware Overload Trio 2 / Shareware Overload Trio Volume 2 (Chestnut CD-ROM).ISO / dir26 / med9410b.zip / M94A0350.TXT < prev    next >
Text File  |  1994-10-08  |  4KB  |  55 lines
  1.        Document 0350
  2.  DOCN  M94A0350
  3.  TI    Expression and purification of nonglycosylated SIV proteins, and their
  4.        use in induction and detection of SIV-specific immune responses.
  5.  DT    9412
  6.  AU    Hanke T; Botting C; Green EA; Szawlowski PW; Rud E; Randall RE; School
  7.        of Biological and Medical Sciences, Division of Cell and; Molecular
  8.        Biology, University of St. Andrews, Fife, U.K.
  9.  SO    AIDS Res Hum Retroviruses. 1994 Jun;10(6):665-74. Unique Identifier :
  10.        AIDSLINE MED/94355111
  11.  AB    Two commercially available expression vectors were modified to generate
  12.        plasmids pGEXcPk and pQ9cPk. Proteins expressed from pGEXcPk and pQ9cPk
  13.        had a short oligopeptide tag termed Pk at their carboxy termini and
  14.        either glutathione S-transferase (GST) or a small histidine (His) tag,
  15.        respectively, at their N termini. GST fusion proteins can be purified on
  16.        immobilized glutathione and proteins coupled to the His tag selectively
  17.        bind to Ni(2+)-NTA columns. The Pk tag is recognized by monoclonal
  18.        antibody (MAb) SV5-P-k, previously produced in our laboratory. Thus
  19.        proteins expressed from the pGEXcPk and pQ9cPk vectors can be purified
  20.        in a two-step procedure, first via the N-terminal tag and second via the
  21.        C-terminal tag. The combination of two affinity purification steps
  22.        significantly improves the antigen purity and selects for full-size
  23.        proteins. Moreover, by using the MAbSV5-P-k in the second purification
  24.        step, Pk-linked antigens can be assembled directly into solid
  25.        matrix-antibody-antigen (SMAA) complexes for use as vaccines. The genes
  26.        for nef, endonuclease, p15, p17, p27, protease, Rev, reverse
  27.        transcriptase (rt), tat, vif, vpr, and vpx of simian immunodeficiency
  28.        virus (SIV mac 251) were cloned and expressed as both GST-SIV-Pk and
  29.        His-SIV-Pk proteins. Multivalent SMAA complexes were made that contained
  30.        His-p17-Pk, His-p27-Pk, His-rt-Pk, His-vpx-Pk, and His-vpr-Pk. Following
  31.        two immunizations of mice with this mixture, antibodies could be
  32.        detected to all five SIV antigens. When compared to single-protein
  33.        immunizations, the immunogenicity of some of the proteins in this
  34.        cocktail was either enhanced or decreased. Mice were also immunized with
  35.        His-p17-Pk or His-p17-Pk-antibody complexes in the presence or absence
  36.        of alum. The antibody-antigen complexes induced two- to four-fold higher
  37.        antibody levels than antigen alone but did not appear to be more
  38.        immunogenic in inducing lymphoproliferative responses. Sera from
  39.        SIV-infected macaques were tested for the presence of antibodies
  40.        reacting with the recombinant proteins by Western blot analysis.
  41.        Antibodies to endonuclease, p15, p17, p27, rt, and vif were readily
  42.        detected, antibodies against protease and vpx were present at much lower
  43.        levels, but no antibodies were detected to nef, rev, tat, or vpr. Thus,
  44.        we have developed a comprehensive range of reagents (available on
  45.        request) that can be used to examine immune responses to SIV in both
  46.        mice and monkeys.
  47.  DE    Animal  Antigen-Antibody Complex/IMMUNOLOGY  Escherichia coli/GENETICS
  48.        Macaca  Mice  Plasmids  Support, Non-U.S. Gov't
  49.        SIV/*CHEMISTRY/*IMMUNOLOGY  Viral Fusion Proteins  Viral
  50.        Proteins/GENETICS/*IMMUNOLOGY/*ISOLATION & PURIF  JOURNAL ARTICLE
  51.  
  52.        SOURCE: National Library of Medicine.  NOTICE: This material may be
  53.        protected by Copyright Law (Title 17, U.S.Code).
  54.  
  55.